Descobertas recentes sobre a infecção por EHP em camarões

A microsporidiose hepatopancreática foi descoberta pela primeira vez em 2009 e agora é endêmica em muitos dos principais países produtores de camarão, onde tem afetado a sustentabilidade econômica, a produção, a lucratividade e o fornecimento de camarão aos mercados globais. É causada pelo Enterocytozoon hepatopenaei (EHP), um parasita microsporídeo infeccioso que afeta as células tubulares do hepatopâncreas das espécies de camarões Penaeid. o Enterocytozoon hepatopenaei não requer outros hospedeiros para a transmissão, portanto, é uma doença altamente contagiosa por transmissão horizontal. A infecção por EHP é geralmente caracterizada por crescimento lento e ampla distribuição de tamanho e pode ser correlacionada positivamente com altas densidades de estocagem (Geetha et al. 2022). Ela pode ser observada no estágio inicial da produção de pós-larvas em hospitais - principalmente na Tailândia, Vietnã, Indonésia, Malásia e China. Em um estudo realizado por Geetha et al. (2022), foi demonstrado que a EHP causa uma perda média de US$ 813 por tonelada de produção na criação indiana de camarão Penaeus vannamei.

Infecção por EHP no camarão branco do Pacífico

Em um estudo realizado por Kumar et al. (2022), as enzimas digestivas, o metabolismo, a fisiologia, a imunidade e as respostas de crescimento do camarão branco do Pacífico (P. vannamei) em diferentes intervalos de tempo foram investigadas após 90 dias de um desafio com EHP e comparadas a um grupo de controle (não desafiado).

As enzimas digestivas α-amilase e lipase foram significativamente reduzidas (P < 0,05) no grupo desafiado pelo EHP. As variáveis metabólicas, como triglicerídeos (TG), proteína total (TP), colesterol (CL), glicose (GL) e alanina aminotransferase (ALT), foram significativamente (P < 0,05) reduzidas no grupo desafiado pelo EHP. A resposta imune não específica foi afetada pela infecção por EHP, diminuindo a atividade da fosfatase alcalina (ALP), catalase (CAT), γ-glutamil transferase (GGT), capacidade antioxidante total (T- AOC), ânion superóxido (SOA), fenoloxidase (PO) e contagem total de hemócitos (THC). A FCR do grupo desafiado foi de 3,01 ± 0,29, enquanto a do controle foi de 1,64 ± 0,05. O crescimento dos animais desafiados foi de apenas 12,17 ± 0,80 g, enquanto o controle foi de 19,27 ± 0,5 g após 90 dias de cultura.

Em outro estudo realizado por Subash et al. (2022), o camarão Penaeus vannamei foi infectado experimentalmente com EHP por injeção de esporos (~1x10⁵ esporos/camarão) e alimentação oral de hepatopâncreas infectado. Houve uma redução significativa nos parâmetros imunológicos - contagem total de hemócitos (THC), atividade da catalase (CAT) e atividade da lisozima (LYS) - às 6, 24 e 24 horas pós-infecção (HPI), respectivamente.

Por outro lado, o EHP é um parasita que pode ser usado para a prevenção de doenças

Por outro lado, a infecção por EHP resultou em níveis significativamente mais altos de atividade de superóxido dismutase (SOD), atividade de profenoloxidase (proPO) e atividade de explosão respiratória (RBA) às 6 hpi. A infecção por EHP resultou em maior estresse oxidativo (RBA) às 6 hpi e foi neutralizada por SOD e CAT para proteger a célula hospedeira de danos oxidativos. A expressão do gene Toll foi ativada como uma resposta precoce, pois o EHP interage com o hospedeiro e ativou o sistema de profenoloxidase e a migração de hemócitos para o local da infecção para combater o EHP invadido a partir de 6 hpi. Embora as respostas adequadas tenham sido acionadas, parece que elas não são eficientes o suficiente para eliminar o EHP. Além disso, as lisozimas que agem dentro dos hemócitos parecem ter sido desativadas pelo EHP ou talvez não tenham sido liberadas dos hemócitos, pois os hemócitos não conseguem produzir autodegranulação ou são incapazes de fagocitar os parasitas intercelulares, já que os níveis foram reduzidos a partir de 24 hpi.

Cao et al. (2023) investigaram as alterações no nível do transcriptoma do hepatopâncreas após o desafio artificial de Penaeus vannamei saudável com EHP. Os genes diferencialmente expressos (DEG) estavam intimamente relacionados à resposta imunológica, e o aprimoramento da função hematopoiética e a estimulação da via de sinalização Jak-STAT resultaram na ativação final do sistema imunológico. A infecção por EHP aumentou o metabolismo lipídico e inibiu o metabolismo de carboidratos, aminoácidos e a digestão de proteínas - possivelmente as principais causas que afetam o crescimento normal do camarão.

A hemocitina foi relatada pela primeira vez em Litopenaeus vannamei (LvHCT) contra a infecção por EHP em um estudo realizado por Sukonthamarn et al. (2023). Acredita-se que a hemocitina seja um importante mediador da agregação de hemócitos e do sistema de ativação da profenoloxidase (proPO). a supressão de LvHCT resultou em números mais altos de cópias de EHP. o LvHCT desempenha um papel vital na imunidade inata do camarão contra a infecção por EHP porque o transcrito do gene LvHCT foi regulado positivamente após a infecção por EHP e os números de cópias de EHP foram aumentados em camarões LvHCT-silenciados.

Efeito da qualidade da água e do sistema de cultivo na infecção por EHP

Em um estudo realizado por Shen et al. (2019), o camarão pequeno de crescimento lento, Penaeus vannamei, coletado em tanques de terra mostrou uma alta prevalência de infecção por EHP (91,3%). Curiosamente, o camarão normal de tamanho maior nos tanques de terra também apresentou uma alta prevalência de infecção por EHP confirmada por PCR de primeira etapa (11%) e PCR aninhado (72,4%). Os camarões maiores de uma estufa tiveram uma prevalência menor de EHP (10,6%) do que os camarões maiores normais de tanques de terra (72,4%), nenhuma infecção por EHP foi detectada pela PCR de primeira etapa nos camarões da estufa. Os autores sugeriram que as culturas de camarão em estufas foram menos afetadas pela infecção por EHP, conforme indicado pelo tamanho e peso normais do camarão

Seis tanques superintensivos na Indonésia foram avaliados quanto aos níveis de amônia e nitrito, bem como quanto à infecção por EHP por Nkuba et al. (2021). Um teste de PCR revelou que dois tanques eram positivos para EHP, enquanto os níveis de nitrito e amônia estavam acima de 1 ppm. Os outros quatro tanques foram negativos para EHP, e os níveis de nitrito e amônia estavam abaixo de 1 ppm.

Em outro estudo, observou-se que a infecção por EHP pode ocorrer em uma salinidade de 2 ppt em uma prevalência e gravidade muito baixas, enquanto a infecção foi maior em prevalência e gravidade em uma salinidade de 30 ppt (Aranguren et al. 2021).

Presença de EHP em outros organismos aquáticos presentes em viveiros de camarão

Em um estudo realizado por Dewagan et al. (2023) em uma fazenda de camarões em Maoming, China, os camarões e outros organismos foram investigados quanto ao EHP usando testes de PCR. A EHP foi detectada em Litopenaeus vannamei, Penaeus monodon, caranguejo, mexilhão falso e três espécies de libélulas (Anax parthenope, Pantala flavescens e Ischnura senegalensis).

No exame histopatológico, foram encontrados esporos de EHP em ninfas e libélulas adultas naturalmente infectadas que foram coletadas do viveiro de camarões. Os resultados da hibridização de fluorescência in situ mostraram um sinal positivo para a infecção por EHP na gordura corporal das ninfas de libélulas. Esporos de microsporídios imaturos e maduros e plasmódios de esporogônias tardias foram observados no citoplasma das ninfas de libélulas por meio de microscopia eletrônica de transmissão

A transmissão do EHP do camarão para as ninfas de libélulas foi confirmada por meio de experimentos de desafio nos quais ninfas de libélulas sem EHP coabitaram com camarões infectados com EHP. A transmissão do EHP de ninfas de libélulas para camarões foi demonstrada por meio da coabitação de ninfas de libélulas infectadas pelo EHP com camarões sem EHP e experimentos de desafio de administração oral. O estudo confirmou que as libélulas podem ser outro hospedeiro para o EHP e que uma rota de transmissão horizontal do EHP é possível entre libélulas e camarões.

(Dewagan et al. 2023)

Em outro estudo, na Malásia, realizado por Sajiri et al. (2023), a EHP foi detectada em 82 espécimes aquáticos que pertencem aos filos Arthropoda, Mollusca e Chordata usando a PCR direcionada aos genes que codificam a proteína da parede do esporo (SWP). A prevalência média de EHP por PCR foi de 82,93% para todos os três filos (Arthropoda, Mollusca e Chordata). Esses resultados sugerem a presença de esporos de EHP em organismos aquáticos nos viveiros de camarão que são vetores de transmissão em potencial (veja a tabela abaixo)

Microbiota intestinal e EHP

Shen et al. (2021) investigaram a ligação entre infecção por EHP, retardo de crescimento e microbiota intestinal em camarões pequenos, médios e grandes (P. vannamei). Todos os grupos de camarões vieram do mesmo lote de pós-larvas e foram cultivados em um tanque sob a mesma dieta e condições ambientais. O camarão pequeno apresentou o maior número de cópias de EHP. Os perfis de eletroforese em gel com gradiente desnaturante (DGGE) mostraram que os padrões bacterianos intestinais dos camarões pequenos e médios eram semelhantes e diferentes do padrão bacteriano dos camarões grandes. Esses resultados indicaram que a microbiota intestinal foi influenciada pela gravidade da infecção por EHP e pelo período sucessivo de infecção por EHP. Outra observação foi que a abundância relativa de Vibrio foi maior no camarão pequeno, sugerindo maior suscetibilidade à invasão bacteriana.

EHP e síndrome das fezes brancas (WFS)

Em um estudo experimental realizado por Aranguren et al. (2021), a WFS foi reproduzida com sucesso em P. vannamei. A WFS é uma doença de Penaeus monodon e P. vannamei associada à presença de cordões fecais brancos flutuantes em tanques de crescimento e manifestações clínicas de intestinos brancos e hepatopâncreas pálido. Os patógenos responsáveis por essa etiologia permanecem incertos e suspeita-se que ela esteja ligada a um patobioma causado por vários patógenos entéricos. A associação de vários patógenos baseia-se em estudos que observaram a WFS em locais onde a prevalência e a gravidade da infecção por EHP eram altas. Neste estudo, uma reprodução experimental de WFS em P. vannamei pré-infectado com EHP foi realizada com sucesso após o desafio com um isolado distinto de Vibrio parahaemolyticus. A qPCR constatou que os camarões infectados com EHP e V. parahaemolyticus tinham uma carga significativamente maior de EHP em comparação com os camarões infectados apenas com EHP. Neste estudo, uma relação sinérgica entre o EHP e o V. parahaemolyticus isolado resultou na manifestação de WFS.

Conclusões

A EHP é uma doença altamente contagiosa conhecida por ter um impacto devastador na produção de camarão. Sua disseminação geográfica está aumentando, portanto, é fundamental que os produtores de camarão tenham protocolos de gestão em vigor para prevenir ou mitigar os impactos dessa doença.

Não há tratamento eficaz conhecido contra a infecção por EHP. Mas o impacto dos esporos e da infecção pelo EHP pode ser controlado por meio de ações apropriadas e eficazes (veja abaixo). Uma boa biossegurança e um programa de monitoramento ativo são essenciais.

Principais recomendações

• Um plano de biossegurança deve ser implementado para evitar ou mitigar as infecções por EHP nas fazendas.
• Apenas estocar pós-larvas que tenham se mostrado negativas para esporos de EHP por meio de testes de PCR.
• Preparar os tanques antes de estocar com pós-larvas livres de esporos de EHP.
• A gravidade da infecção por EHP em viveiros de baixa salinidade (<10 ppt) é significativamente menor em comparação com viveiros de salinidade mais alta (>25 ppt).
• Recomenda-se o uso de ração de alta qualidade e aditivos funcionais para ração que modulem a resposta imunológica e atenuem o estresse em camarões para evitar infecções secundárias por vibriose e pelo vírus da síndrome da mancha branca.

Saneamento

• Saneamento completo com cal viva e lagoas de secagem para eliminação de esporos de EHP.
• Saneamento de equipamentos e ferramentas com permanganato de potássio (KMnO₄) (40 ppm por 15 minutos) (Aldama-Cano et al. 2018).
• Remova os organismos aquáticos que são potenciais portadores passivos ou ativos de esporos de EHP por meio de filtração da água do novo tanque.
• A boa qualidade da água e/ou os parâmetros da água devem ser mantidos durante todo o ciclo de produção.